潔淨（jìng）廠房|微生物檢（jiǎn）測（cè）培養基製備，這些細（xì）節你（nǐ）都注意到了嗎（ma）？

培養基是提供細胞營養和促使細（xì）胞增殖的基礎物質，也是細（xì）胞生長和（hé）繁殖的（de）生存環（huán）境。

培養基配成後（hòu）一般（bān）需測試並調節pH，還須進（jìn）行滅菌，通（tōng）常有（yǒu）高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由於富含營養（yǎng）物質（zhì），易被汙染或變（biàn）質。配好後不宜久置，最（zuì）好現配現用。

一、稱取

用精確度1/100的電子天（tiān）平稱取培（péi）養基所需藥品。先根據配方計算出配製一定量培養基所需各（gè）種（zhǒng）成分藥品的量，然後（hòu）用（yòng）天平準確稱（chēng）取。稱量時用稱量紙折疊成簸箕狀盛放藥品。

二、溶化

培（péi）養基放入燒杯或搪瓷缸中，慢慢加入少量所需水，邊加入邊用玻棒攪拌。如果培養基中不含有瓊脂，培養（yǎng）基不需（xū）要加熱；如果含有瓊脂，則需要用（yòng）本生燈或電磁爐加（jiā）熱煮沸，完全溶解後，再補齊所需水，並攪拌均勻。如果配製的培養基量很大，可用不鏽鋼（gāng）鍋加熱（rè）溶化，可先用溫水加熱並隨時攪動，防止焦化，如有焦化現象，配製的培（péi）養基就不能使用，要重新配製。

配製培養基時（shí）不可用銅或鐵的容器（qì）溶（róng）化，因銅或鐵製容器可能會使培養基中的銅和鐵的含量超（chāo）標，影響實驗（培養基中（zhōng）銅含量（liàng）大於0.3mg/L，細菌不宜生長，鐵含量超過0.14mg/L，妨礙細菌產毒素）。對容易發生反應，產生（shēng）沉澱的藥品，要分開溶解，最後加入培養基，如磷酸氫二鉀和硫酸鎂。

三、調pH

雖然培養（yǎng）基中（zhōng）含有緩衝物質成分，能使培養基的pH盡可能的保持在要求的範圍內，但是配出（chū）的培養基若不符合要（yào）求，就要進行必（bì）要的調整。如果（guǒ）有已校準pH計，可用pH計，如果沒有（yǒu），可用精密的pH試紙，再根據需（xū）要用1 mol/L氫氧化鈉或1mol/L鹽酸（微調可用0.1氫氧化鈉或0.1mol/L鹽酸）調製所需的pH。培基的pH一般為7.4～7.6，也有酸性或堿性的。用（yòng）氫（qīng）氧化鈉調整的需要（yào）高壓滅菌的培養基，在調整（zhěng）pH時要（yào）調至（zhì）高出所需0.1個～0.2個單位，因用氫氧化鈉調整時，高壓（yā）滅菌（jun1）後（hòu），培養基的pH要降低0.1~0.2。如培養（yǎng）基中含（hán）有碳酸鈣成分，可不pH。

四、過濾

配成的（de）培養基，若無特殊（shū）要求，可省略此步。若有沉澱或渾濁（zhuó）．需要（yào）澄（chéng）清的．液體培養基（jī）可用油紙過濾。而固體培養基可用中間夾（jiá）一薄層脫脂棉的雙層（céng）紗布過濾。如果過濾法還不能達到澄（chéng）清的要求，則可用蛋清澄清法，即培養基加熱冷卻到50~60℃，裝入三角瓶內（不（bú）超過容量的二分之一），按1000mL加人（rén）1個～2個雞蛋的蛋清，用力（lì）搖晃3-5min，高壓（yā）蒸汽滅菌（jun1）121℃、20min，取出趁熱過濾即可。

五、分裝

配製好的培養基根據不同的（de）用途分裝在三角瓶、試管等容（róng）器中，分裝試管（guǎn），如果試管量很大，可用自動（dòng）分液器（qì），如果試管量少，可用漏鬥分裝。分裝量不超過容（róng）器（qì）容積（jī）的三分之二。三角瓶以不超過容積（jī）的二分之一為（wéi）宜；瓊脂斜麵以（yǐ）不超過試管長度的五分（fèn）之一為宜，滅菌後，擺成的（de）斜麵（miàn）為培養基量的三分之一（yī），底層為三分之二的量為宜；半（bàn）固體（tǐ）瓊脂分（fèn）裝量為試管長度的三分之一；用來接種或保菌的高層瓊脂，分裝量為試管（guǎn）長度的四分之一或三分之一，用來接種（zhǒng）厭氧菌的要達到三分之二；瓊脂平板，內徑為90mm的以13mL~15 mL為（wéi）宜，內徑70mm的平板為8mL~10 mL，製成的瓊脂平板若表麵水分較多，可將平板倒扣，放置在37℃培養箱內30min，幹（gàn）燥後再（zài）用。每批培養基應另外分裝一小玻璃瓶（約20mL）與該批培養基同時滅菌，為測定該（gāi）批培養基最終pH。

六、滅（miè）菌

分裝好的培養基應（yīng）立即進行滅菌。滅菌的方法種類如下：

1.高壓蒸汽（qì）滅（miè）菌法

大多耐熱培（péi）養基都可用此法，小量分（fèn）裝時，用121℃，15min；滅菌量大（dà）時，用121℃，30min滅（miè）菌；含糖類的培（péi）養基隻能113~115℃，15min滅菌（jun1），避免糖類遭破壞。

2.煮沸滅菌法

對含有不耐高溫物質的培養基，可使用此方法。

3.過濾除菌

以過濾的方法除菌，用無菌操作（zuò）技術，定量加入培養基。血液、抗（kàng）生素可用無菌操（cāo）作技術抽（chōu）取，加入冷（lěng）卻到50℃左右的培養基中。培養基含有不耐熱的物質時，可用此（cǐ）法。

對LST培養基進行滅菌時（shí），有時發酵管內會有氣泡。為防止發酵管內產生氣泡，可以采取以下幾項措施（shī）：

（1）小倒管浸滿培養基（不留（liú）氣泡（pào））後（hòu）再加入到盛LST的試管中。

（2）滅（miè）菌鍋關閉放（fàng）氣閥前，將鍋內氣體排幹淨（jìng）。

（3）試管塞不要塞（sāi）得太緊（使用矽膠塞的時候），勿使用橡皮塞。

（4）不要過早打開滅菌鍋，要等滅菌鍋內（nèi）氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅（miè）菌鍋。

如果（guǒ）以上情況都做到還有氣（qì）泡，可用水做培養基組的對照試驗，若培養基組有氣泡，而對照組沒有氣泡可確定是（shì）培養（yǎng）基自身的（de）原（yuán）因。

七、倒平板

滅菌融化的培養基冷卻到50℃後（hòu），倒入無菌幹燥的培養皿中。培養基的（de）溫度不能過高，否則容易（yì）在培養皿的內蓋（gài）上形成太多的冷凝水；溫度太（tài）低，培養基又容易凝固成塊，無法製成平板。倒平（píng）板時，應在靠近酒精（jīng）燈火焰進行，以免外（wài）界的雜菌落入平板內，左手拿培（péi）養皿，右手（shǒu）拿三角瓶的底部，用左手的小指和手掌部（bù）位把三角瓶的棉塞拔下，灼燒瓶口，用大拇指和食指把培養皿蓋（gài）打（dǎ）開一條縫，至瓶口剛好伸入，倒入培養（yǎng）基，以（yǐ）鋪（pù）滿底為限，不超過培養皿高度的（de）三分之一，迅速蓋好蓋，放在桌麵上，輕輕（qīng）地（dì）轉動培養皿，使培養基分布均勻，冷凝後即可。

八、擺斜麵

裝在試管中的瓊脂（zhī）培養基，在滅菌完成後，趁熱立即（jí）擺放在木棒（或玻璃棒）上，並成適當的斜度，冷卻後，瓊脂（zhī）凝固即成斜（xié）麵。斜麵長度不用超過試（shì）管二分之一。

九、質量檢查

培養基滅菌後仔細（xì）檢查（chá）一遍，發現有破裂、水分浸（jìn）入、色澤異常、棉塞被培養基（jī）沾染，都要丟棄，不能再用。並測定其最終pH。還需進行無菌檢查和效果檢查。無菌檢查是（shì）將滅菌後的培養基（jī）取1管（瓶）~2管（瓶（píng）），37℃恒溫培（péi）養1d～2d，確定無雜菌生長；效果檢（jiǎn）查是用標（biāo）準（zhǔn）菌株接種在相關的培養基上檢查檢查菌的生長、形態及生化情況，與已知情況相符。兩種情（qíng）況都合格，配（pèi）製的培養基（jī）方可使（shǐ）用。

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